操作步骤三组织切片染色

1、Giemsa工作液的配制: 按试剂(A): 试剂(B) =1:9配制Giemsa stain工作液,即取1份的Giemsa stain储存液(10×)加入到9份的磷酸盐缓冲液中,充分混匀,即为Giemsa stain工作液。配制后的Giemsa stain工作液为即用型试剂,不易保存,即用即配。
2、新鲜组织立即置于Regaud固定液固定2天,期间应更换1次固定液。
3、3%的重铬酸钾固定1天。
4、流水冲洗16个小时或过夜。
5、按照常规脱水、包埋。
6、切片,厚度约为5μm。
7、常规脱蜡至水。  
8、蒸馏水清洗2次,每次约1min。  
9、置于含有Giemsa stain工作液的染缸内,浸染18~24h。
10、蒸馏水稍微清洗。  
11、0.1~0.5%的乙酸洗1~2min。
12、自来水稍微冲洗。  
13、用无水乙醇迅速脱水3次,每次5~10s。
14、二甲苯透明。
15、中性树脂封固。  
染色结果:
细胞核蓝色至紫色
细胞质淡蓝色
嗜铬细胞胞质黄绿色
结缔组织淡红色
注意事项:  
1、 血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀,以免影响染色结果。  
2、 涂片染色中Giemsa染色后,请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。
3、 如果染色过深或过浅,应调整染色时间或工作液的浓度。  
4、 Giemsa涂片染色和组织切片染色中,pH值对染色有一定影响,载玻片应清洁无酸 碱污染以免影响染色结果。  
5、染色液在稀释后液面应有金属光泽,表示染液有染色作用,否则染色液可能失效。 6、 Giemsa组织切片染色中,染色后需用大量0.1~0.5%的乙酸急速冲洗,避免浮面     沉淀 物污染切片后难以洗脱。  
7、0.1~0.5%的冰乙酸分化,常用于Giemsa组织切片染色,如有必要亦可用于细胞涂片,但其浓度应适量下调。0.5%的冰乙酸分化切片时,切片呈粉红色即可终止。
8、Giemsa组织切片染色中,无水乙醇脱水要迅速,否则切片易褪色。  
9、Giemsa涂片染色和组织切片染色中,如需急速获得结果,可以按Giemsa stain储存液:磷酸盐缓冲液(1×) =1:1配制,即取吉姆萨储存液(10×)1份、磷酸盐缓冲液(1×)1份,充分混匀,即为快速吉姆萨染色工作液,将染色液滴加于细胞涂片或组织切片上,加热染色,20~30s后重新加染色液,反复5~10次,其余步骤同上。
10、染色液可重复使用,但不能多次重复,若有沉淀物应过滤后使用。  
11、Regaud固定液:按3%重铬酸钾水溶液:甲醛=4:1配制,临用前混匀,1~2天后失效。  
12、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 13、使用场所应通风,并远离火源。  
有效期: 24个月有效甲基绿